TÁCH DÒNG VÀ BIỂU HIỆN GIEN xynA MÃ HOÁ ENZYM XYLANASE A TỪ CHỦNG BACILLUS SUBTILIS CN2 Ở ESCHERICHIA COLI BL21(DE3)

Abstract

Bacillus subtilis CN2 phân lập từ nước nắm của Việt Nam. Gien xynA từ genome của Bacillus subtilis CN2 được nhân lên sử dụng cặp mồi thiết kế trên cơ sở trình tự gien xylanase của các chủng B. subtilis trên Genbank. Gien xynA được tách dòng ở E. coli DH5α và biểu hiện ở E. coli BL21 với vector pET22b(+). Gien xynA gồm 639 bp và có độ tương đồng 96 % với gien xynA của chủng Bacillus sp. BP-7. Kết quả này cho thấy rằng gien xynA của B. subtilis CN2 có khả năng có đặc tính giống với xynA của chủng Bacillus sp. BP-7. Khi biểu hiện gien xynA ở E. coli BL21 (D3) với IPTG là chất cảm ứng thì xylanase tạo thành ở dạng kết tủa là do quá trình biểu hiện quá mạnh. Khi thay thế môi trường LB với chất cảm ứng là IPTG bằng môi trường TB với chất cảm ứng yếu hơn là α- lactose thì lượng protein hòa tạo thành tăng lên. Protein này có hoạt tính cao gấp 430 lần so với môi trường chứa chất cảm ứng là IPTG.